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支原體檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介

支原體檢測試劑盒:
(1)僅需1μl培養(yǎng)細(xì)胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發(fā)光檢測儀等復(fù)雜實驗設(shè)備;
(2)僅需1h出結(jié)果,簡單快速靈敏的細(xì)胞支原體檢測方法;
(3)僅需一步操作完成整個實驗,實驗結(jié)果根據(jù)反應(yīng)液顏色變化肉眼直觀容易辨別,無需電泳,避免多步操作開蓋帶來的假陽性 風(fēng)險;
(4)靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR法,能夠

產(chǎn)品型號:
更新時間:2024-06-13
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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品牌其他品牌貨號MY1000-1-25T/MY1000-2-50T
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,食品,生物產(chǎn)業(yè)

一、支原體檢測試劑盒的產(chǎn)品特色:  

(1)僅需1μl培養(yǎng)細(xì)胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發(fā)光檢測儀等復(fù)雜實驗設(shè)備;  

(2)僅需1h出結(jié)果,簡單快速靈敏的細(xì)胞支原體檢測方法;  

(3)僅需一步操作完成整個實驗,實驗結(jié)果根據(jù)反應(yīng)液顏色變化肉眼直觀容易辨別,無需電泳,避免多步操作開蓋帶來的假陽性風(fēng)險;  

(4)靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR法,能夠檢測細(xì)胞培養(yǎng)中常見的多種支原體(豬鼻支原體、jing氨酸支原體、口腔支原體、萊氏無膽甾原體、發(fā)酵支原體、唾液支原體、人型支原體、梨支原體,占支原體污染的98%)。  


二、支原體檢測試劑盒組成(25T):

組分

規(guī)格

溶液A

580μl

溶液B

25μl

陽性對照

15μl

石蠟油

700μl

三、實驗步驟:  

(1)待測細(xì)胞培養(yǎng)液上清準(zhǔn)備  

待測細(xì)胞在培養(yǎng)2-3天且融化度最好達(dá)到80%以上時取細(xì)胞培養(yǎng)液200μL以上體積,按照200g離心5分鐘,然后取上清液進行后續(xù)檢測(不要取到管底部50μl培養(yǎng)液及細(xì)胞沉淀即可);  

(2)反應(yīng)體系配制(首先將溶液A、溶液B、陽性對照、石蠟油解凍融化后立即放置于冰上)  

將溶液A從-20℃取出,待其解凍融化后,上下輕輕顛倒混勻。根據(jù)待測細(xì)胞樣本數(shù)量在微量離心管中配制如下反應(yīng)體系(反應(yīng)體系配制過程在冰上進行非常重要);

組分

單個樣品反應(yīng)體積(μl)

樣品總數(shù)

總體積(μl)

溶液A

23μl

N

(N+3)*23

溶液B

1μl

N

(N+3)*1

備注:每次實驗需要1個陰性對照、1個陽性對照及由于移液器存在移液誤差,所以檢測N個樣品一般推薦配制N+3個上述反應(yīng)體系  

用震蕩器輕輕混勻,然后分裝到PCR管中(推薦使用200μl體積PCR管),每管分裝24μl上述混勻后的反應(yīng)液;  

(3)上樣(整個上樣過程保持冰上進行非常重要,特別是反應(yīng)液上方覆蓋的石蠟油需要冰上預(yù)冷)  

待測樣品:向反應(yīng)管中加入1μl待測離心后培養(yǎng)液上清,然后用此加液槍上下移動輕輕吹打5次;  

陰性對照:不加入任何樣品或加入1μl無菌水;  

陽性對照:加入1μl陽性對照樣品,然后用此加液槍上下移動輕輕吹打5次;  

然后每反應(yīng)管溶液上方輕輕中加入25μl石蠟油(水浴鍋中進行反應(yīng)),以防止液體蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。加入石蠟油時請注意每次更換槍頭,防止樣品之間交叉污染。如果反應(yīng)是在PCR儀中進行反應(yīng),不需要加入石蠟油。  

(4)反應(yīng)  

將水浴鍋或PCR儀溫度設(shè)置成61℃,放入反應(yīng)管,孵育60min;  

備注:  

1、水浴鍋實際溫度可能與設(shè)置溫度有所偏差,建議先用溫度計進行校準(zhǔn)。實際上59-63℃反應(yīng)都可以進行,但會影響檢測靈敏度;  

2、反應(yīng)產(chǎn)物不可開蓋,否則產(chǎn)生的氣溶膠會導(dǎo)致后續(xù)檢測假陽性的出現(xiàn)。建議將反應(yīng)管包扎在塑料袋或手套中,丟棄到專用垃圾桶中,并及時清理;  

3、不建議使用烘箱或金屬浴進行加熱反應(yīng);  

(5)結(jié)果判斷  

61℃反應(yīng)60min后,立刻取出反應(yīng)管,放于室溫。在光線良好的環(huán)境中觀察反應(yīng)結(jié)果(建議以白紙為背景)。如果反應(yīng)液仍為藍(lán)紫色,則判定為陰性;若反應(yīng)液為天藍(lán)色,則判定為陽性。

四、相關(guān)文獻  

1、ShiyuHe,YanzhiHuang,YanlingZhao.AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease.FrontiersinMicrobiology.2020;12(11):734-743.  

2、AudreyJean,FlorenceTardy,OmranAllatif.AssessingmycoplasmacontaminationofcellculturesbyqPCRusingasetofuniversalprimerpairstargetinga1.5kbfragmentof16SrRNAgenes.PLOSONE.2017;12(2):e0172358.  

3、ZohreSoheily,MohammadSoleimani,KeivanMajidzadeh-Ardebili.DetectionofMycoplasmaContaminationofCellCulturebyALoop-MediatedIsothermalAmplifcationMethod.CellJ.2019;21(1):43-48.  

4、XinXu,XueyuWang,WenHu.AnImprovedPolymeraseCross-LinkingSpiralReactionAssayforRapidDiagnosticofCanineParvovirus2Infection.FrontiersinVeterinaryScience.2020;7(57):1629-1636.

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